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【Brij35去污剂】β2肾上腺素受体基因的改造及在无细胞 合成体系中的表达

2022-09-14

摘  要:依据大肠杆菌密码子偏好性,设计合成β2肾上腺素受体(β2 adrenergic receptorβ2AR)基因序列,应用大 肠杆菌无细胞系统对其进行高效表达,经负载镍离子的顺磁颗粒MagneHis™ Ni-Particles纯化后,对受体蛋白进行 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresisSDS-PAGE)和活 性鉴定。结果表明:改造后的β2AR基因密码子适应指数(codon adaptation indexCAI)为0.96GC含量从58%低到46.17%,更有利于该基因在大肠杆菌系统中的表达。表达体系中优化后的Mg2浓度为22 mmol/L,此时表达量 1 250 μg/mLSDS-PAGE分析显示,纯化蛋白在47 kDa左右出现清晰的特异性条带,与预期结果一致,纯度大于 90%。直接酶受体分析检测结果显示,当纯化受体蛋白1500稀释包被时,该重组受体与盐酸克伦特罗、沙丁胺醇 及莱克多巴胺的酶标记物结合的OD值分别为0.9760.8360.728,亲和活性依次降低。β2AR蛋白在无细胞体系中 的成功表达,为研发基于受体的β激动剂多残留快速检测技术提供了理论支持。 关键词:β2肾上腺素受体;密码子优化;大肠杆菌无细胞合成体系;表达;β激动剂检测

其中 Brij35去污剂 购自上海语燕生物技术有限公司


_2肾上腺素受体基因的改造及在无细胞合成体系中的表达_王健.pdf



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