Western Blot实验是分子生物学和生物化学研究中用于检测特定蛋白质表达的经典技术。以下是Western Blot实验的详细流程以及实验所需的关键试剂，由语燕生物为您提供的专业指南。
实验流程：
蛋白样品制备：首先需要从细胞或组织中提取蛋白质，并使用裂解液（如RIPA裂解液）。样品处理时需加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白降解，并使用BCA试剂盒等方法测定蛋白浓度。
SDS-PAGE电泳：将蛋白样品通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离。电泳缓冲液通常为Tris-甘氨酸/SDS缓冲液。
转膜：将电泳分离的蛋白质转移到固相载体上，常用的载体有硝酸纤维素膜（NC）或PVDF膜。转膜过程中需要使用转膜缓冲液。
封闭：为防止抗体非特异性结合，需要用封闭液（如5%脱脂奶粉或BSA）处理膜。
一抗孵育：使用特异性的一抗与目标蛋白结合。
二抗孵育：使用标记有酶或荧光的二抗与一抗结合，以便于检测。
显色：通过化学发光或显色法检测目标蛋白的存在和量。
实验所需试剂：
裂解液：如RIPA裂解液，用于细胞或组织裂解。
蛋白酶抑制剂：如PMSF，用于防止蛋白降解。
BCA蛋白定量试剂盒：用于测定蛋白浓度。
SDS-PAGE试剂：包括丙烯酰胺、N,N’-亚甲双丙烯酰胺、SDS溶液、Tris-HCl缓冲液等。
转膜缓冲液：用于蛋白从凝胶转移到膜上。
封闭液：如5%脱脂奶粉或BSA。
一抗和二抗：特异性抗体用于检测目标蛋白。
化学发光或显色试剂：用于检测二抗标记的信号。
PBST或TBST：用于实验过程中的洗涤步骤。
语燕生物提供的Western Blot全套试剂选择指南，涵盖了实验所需的全部试剂，包括即用型试剂盒，无需自行配制辅助试剂，简化了实验操作流程。选择语燕生物，您将获得高品质的试剂和专业的技术支持，确保您的Western Blot实验顺利进行。