LOX活性测定试剂盒说明书

产品规格

• 100管/96样

产品内容

• 试剂一：液体×1瓶，4℃保存。

• 试剂二：液体×1瓶，4℃保存。

• 试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加2ml试剂二，充分溶解。

产品说明
LOX广泛存在于植物组织中，催化不饱和脂肪酸氧化反应，导致膜脂过氧化。在植物的生长发育、成熟衰老及逆境胁迫过程中具有重要作用。LOX催化亚油酸氧化，氧化产物在234nm处有特征吸收峰；通过测定234nm吸光度增加速率，来计算LOX活性。

自备仪器和用品

• 研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、可调式移液枪和蒸馏水。

操作步骤
1. 样品处理

• 按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。

• 16000g，4℃离心20min，取上清置冰上待测。

2. 仪器准备

• 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长到234nm，蒸馏水调零。

• 试剂二在25℃水浴中预热30min以上。

3. 测定
空白管

• 依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL蒸馏水、160μL试剂二和20μL试剂三，迅速混匀后于234nm比色，记录15s和75s的吸光值，分别记为A1和A2。

测定管

• 依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL上清液、160μL试剂二和20μL试剂三，迅速混匀后于234nm比色，记录15s和75s的吸光值，分别记为A3和A4。

4. 计算LOX活性
（1）按照蛋白浓度计算
活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟催化吸光值变化0.001个单位为1个酶活单位。
LOX (U/mg prot) = 10000×[(A4－A3)－(A2－A1)]÷Cpr

（2）按照样本质量计算
活性单位定义：25℃中每克组织每分钟催化吸光值变化0.001个单位为1个酶活单位。
LOX (U/g) = 10000×[(A4－A3)－(A2－A1)]÷W

（注：Cpr为上清液蛋白浓度，mg/mL，需另外测定；W为样品质量，g）

注意事项

1. 试剂三易自发氧化，必须临用前配制，并且当天使用完毕。

2. 样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日完成酶活性测定。

本说明书仅供参考，具体操作需严格遵循实验步骤，并根据实验条件进行调整。

微量法植物中脂氧合酶（LOX）活性测定试剂盒说明书.pdf