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血清检测技术及常见问题

2022-08-12


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血清的作用

提供对维持细胞指数生长的激素,提供其它基础培养基中没有或含量很少的营养物,以及主要的低分子营养物;

提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属和其它激素等,能结合或调变它们所结合的物质活力;

有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合,起到解毒作用;

细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子的来源;

具有起酸碱度缓冲液的作用;

提供蛋白酶抑制剂,在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活,保护细胞不受伤害。


血清的运输、存储及使用运输:

冷冻(我司采用干冰运输)、密封、避光;

产品验收:

①血清内外包装均应完好,无破损、裂缝、溢渗等现象;

②血清到货时应为冷冻或冰水混合状态,不应完全融化;

③若出现上述现象,请拍照取证后及时与我们联系,以便及时进行更换。

储存条件:

贮藏温度≤-15℃;4℃存放时,请勿超过一个月。

血清的解冻:

①请在 2℃~8℃环境中解冻,不宜在较高温度下进行解冻;

②血清解冻的过程中请时不时摇匀(小心勿造成气泡),使血清成分和温度均匀,从而减少沉淀的产生;

③根据需求,将血清分装成适用的小规格,分装时不要装太满(如50mL管只装45mL),解冻后应尽快用完,尽量避免反复冻融;

④血清不宜在室温中长时间放置,使用后尽快放回 2℃~8℃中;

高温解冻、剧烈摇晃、反复冻融、放置时间过长等,均会导致血清品质的降低。


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血清沉淀

使用浓度:常用5~20% ,血清浓度增加可以促进细胞增殖,但快速增殖可能会导致部分二倍体细胞恶性转化。

血清沉淀是什么?

 血清中经常会出现肉眼可见的沉淀,其成分有多种类型,产生的原因有很多,主要有纤维蛋白、磷酸钙还有一些其它成分。

1. 纤维蛋白(Fibrin)

血清中肉眼可见的沉淀物大多属于这一类型。由于在生产过程中,血清采集、过滤(3 次 0.1 μm过滤)和灌装处理都是在低温条件下快速完成, 此时血清中纤维蛋白原(Fibrinogen)处于溶解状态。但在解冻之后, 血清中纤维蛋白原往往会发生凝集,形成肉眼可见的沉淀。

2. 磷酸钙(Calcium Phosphate)

这是一种常见的沉淀成分,通常会造成血清出现云雾状浑浊。当产品在 37℃保存时,这种现象尤其明显,在倒置显微镜下可观察到小黑点的存在。这些小黑点在布朗运动的作用下四处游动,常被误认为是微生物污染。

3. 其他成分(Other)

血清中的其他成分也会形成沉淀,例如胆固醇形成的油脂滴和其他蛋白沉淀等。

血清沉淀会影响细胞培养吗

    如前文所说,我们在出厂前都会对血清进行一系列质检测试,确保血清质量达到严格标准。血清测试和公司细胞库技术员培养经验也表明,其沉淀成分不会影响血清作为细胞培养添加物的表现。这一点得到了众多客户和其他血清供应商的肯定。解冻之后, 血清中纤维蛋白原往往会发生凝集,形成肉眼可见的沉淀。

    磷酸钙颗粒经常会被当成微生物污染而引发不必要的担忧。一般情况下,当操作人员融化血清后注意到有雾状浑浊时,常将其存放在 4℃冰箱中观察,并考虑接下来是否继续使用。但这样可能会使沉淀进一步增多,反而会使血清更加浑浊,进而误以为存在血清污染。并且,在倒置显微镜下,可在血清中观察到四处游动的小黑点(磷酸钙颗粒的布朗运动),更容易使人误以为存在微生物污染。

为防止这类误解的产生,我们不建议客户培养血清来验证是否存在污染,而是将血清直接接种在细菌培养基上进行培养,以观察是否有细菌的增殖。且,进行革兰氏染色,并在油镜(100 X 10 倍)下观察可直接确认是否存在微生物污染。

1. 正确解冻

    参照前述血清的解冻方法及注意事项。

2. 使用和保存注意事项

血清沉淀很难预测和避免,出现沉淀后也无需担忧,这并不会影响血清的品质。已知血清沉淀在以下条件下会有增多的可能:

1) 热灭活;

2) 37℃培养;

3) 反复冻融;

4) 伽马射线照射;

5) 2-8℃长期保存;

6) 长期保存于可自动化霜的冰箱中(温度不稳定)。

沉淀的处理:400-600g离心5min,取上清液使用就好,不建议过滤

血清沉淀的形成机理多种多样,具体的机理尚不十分明确。我们尚不能准确预测和控制血清沉淀的产生。目前市面上所有品牌的血清产品都存在沉淀现象,这一点可以在各品牌官方网站上关于沉淀问题的声明上得到证实。


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