过氧化氢酶（CAT）活性检测试剂盒说明书

微量法

注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

规 格：100T/96S

产品内容

• 提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存；

• 试剂一：液体 30mL×1 瓶，4℃保存；

• 试剂二：液体 125μL×1 瓶，4℃保存。

产品说明

CAT(EC 1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是最主要的 H2O2 清除酶，在活性氧清除系统中具有重要作用。

H2O2 在 240nm 下有特征吸收峰，CAT 能够分解 H2O2，使反应溶液 240nm 下的吸光度随反应时间而下降，根据吸光度的变化率可计算出 CAT活性。

需自备的仪器和用品

• 紫外分光光度计/酶标仪

• 台式离心机

• 可调式移液器

• 微量石英比色皿/96 孔（UV 板）

• 研钵

• 冰和蒸馏水

操作步骤

一、粗酶液提取

1. 细菌、细胞或组织样品的制备

• 收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；

• 按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率 20％，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；

• 8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

• 称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2. 血清（浆）样品：直接检测。

二、测定步骤

1. 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 240nm，蒸馏水调零。

2. CAT 检测工作液的配制：用时在试剂二中加入 25mL 试剂一，充分混匀，作为工作液。

3. 测定前将 CAT 检测工作液在 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 10min 以上。

4. 准备96孔UV 板一块（非普通酶标板，普通酶标板只能透过可见光，不能透过紫外光，检测波长小于 340nm务必使用UV 板）。

5. 在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 样本和 190μL 工作液，立即混匀并计时，记录 240nm 下初始吸光值 A1 和 1min 后的吸光值 A2。计算ΔA＝A1-A2。

   
   

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