脂肪酶（LPS）活性检测试剂盒说明书

注意：

• 正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

规格：100T/96S

产品内容：

• 试剂一：液体 120mL×1 瓶，4℃保存。

• 试剂二：液体 6mL×1 瓶，室温保存。

• 试剂三：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。

• 标准品：59.3μL×1 支，4℃保存。临用前加入 1.5 mL 无水乙醇配成 125 µmol/mL 的油酸标准溶液，充分溶解。用前注意解冻溶解。

产品说明：

LPS 又称甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和单酯）。LPS 广泛的存在于各种生物中。血清中 LPS 的异常增高常见于胰腺炎和胰腺癌。

试验中所需的仪器和试剂：

• 研钵

• 台式离心机

• 震荡混匀器

• 可见分光光度计/酶标仪

• 微量玻璃比色皿/酶标板（非聚苯乙烯材质）

• 可调式移液枪

• 甲苯、无水乙醇、冰和蒸馏水

操作步骤：

一、粗酶液提取：

• 组织样品：称取约 0.1g 样品，加试剂一 1.0 mL 充分研磨，于 4℃，15000rpm 离心 30min，取上清液待测。

• 血清样品：直接检测。

二、测定步骤：

1. 可见分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 710nm，甲苯调零。

2. 试剂一和试剂二置于 37℃水浴预热 30min 以上。

3. 标准溶液的稀释：将 125 µmol/mL 的油酸标准溶液用乙醇稀释为 125、62.5、31.25、15.625、7.8125、3.9 µmol/mL 的标准溶液待测。

4. 操作表：

   加入试剂（mL）	空白管	测定管	标准管
   试剂一	0.15	0.15	0.15
   试剂二	0.05	0.05	0.05
   反复震荡混匀
   蒸馏水	0.08
   上清液/血清		0.08
   标准溶液			0.08
   迅速震荡混匀后置于 37℃水浴准确反应 10 min
   甲苯	0.4	0.4	0.4

   反复震荡混匀后，室温 4000rpm 离心 10 min

   取出离心管，小心吸取上层溶液 0.3 mL，加入另一 2 mL 塑料离心管中，按下表操作：

   加入试剂（mL）	空白管	测定管	标准管
   试剂三	0.075	0.075	0.075

   反复震荡混匀；室温 4000rpm 离心 10 min，小心吸取上层溶液 0.2mL，加入微量玻璃比色皿/酶标板中，于 710nm 处测定吸光值。记为 A 空白管，A 测定管，A 标准管，计算ΔA 测定= A 测定管 - A 空白管，ΔA 标准= A 标准管 - A 空白管

三、LPS 活性计算：

• 标准曲线的绘制与酶活计算方法（略，参照原说明书内容）。

注意事项：

1. 甲苯有毒，实验过程中需佩戴手套和口罩。

2. 实验过程中须远离火源。

3. 当吸光度大于 1 时，建议将样本稀释后测量。

4. 如果用酶标板进行试验，建议选用非聚苯乙烯材质的 96 孔板。

微量法脂肪酶（LPS）.pdf